荧光分光光度计在测量物质时，有以下注意事项。样品应盛在四面透光的石英比色皿（荧光池）中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。在荧光分析时，为了得到稳定可靠的数据，一般需要开机预热氙灯大约 30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到 10min 左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。温度变化可引起荧光强度的改变
1、荧光分光光度计— 荧光发射光谱：选择某一固定波长的光激发样品，记录样品中产生的荧光发射强度与发射波长间的函数关系，即得荧光发射光谱。
2、荧光分光光度计—荧光激发光谱：选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度作为激发光波长的函数，即得荧光激发光谱。
3、荧光分光光度计—时间分辨技术；
可用于对混合物中光谱重叠但有寿命差异的组分进行分辨并分别测量。
时间分辨荧光测定公式如下：
1、荧光分光光度计— 光源：
为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2、荧光分光光度计—激发单色器：
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
3、荧光分光光度计—发射单色器：
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。