白话胶体金系列
白话胶体金系列——第一话<烧金> （二）
3.电镜：直观，能看到颗粒形状是否规则，大小是否均一，有无聚集等情况，设备成本高，我没做过，没啥好说的。
4.粒径分析仪：可以看出粒径大小和CV，可以通过PDI判断金子是否聚集，比分光光度计有用，比电镜实惠，但是价格也不便宜。
第一话——烧金（一）基本概念：
1.金子大小：常用20、40、60nm的胶体金颗粒（粒径大小），另外，在说金子大小的时候，有些人还用λ525、530表示，这个是指胶体金最大吸收峰位
白话胶体金系列——第一话<烧金> （一）
基本概念
1.金子大小：常用20、40、60nm的胶体金颗粒（粒径大小），另外，在说金子大小的时候，有些人还用λ525、530表示，这个是指胶体金最大吸收峰位置，理论上这个值比说40nm要准确，因为40nm是估的，这个是实实在在测的，但是他与颗粒大小仅仅有“一定的“关系，而且这个”一定的“很不一定。其他要说明的是，颗粒越小，颜色越粉嫩（偏粉红），最终显色越弱，特异性相对越好；相反颗粒越大，颜色越老
白话胶体金系列——第二话<标记>中篇
而竞争法相反，标记量越低，金子上的抗体越少，与阳性样本反应后，金子上留给T线的未反应抗体就越少，越利于消线，灵敏度越高。
优化蛋白标记量的主要筛选标准是产品性能，标记多少对金标物稳定的影响不是主要考虑项，所以更用不到NaCl滴定法。
4）封闭：
一般的文献都会说封闭是为了封闭金子表面的活跃位点，避免层析中出假阳，慢慢会发现除了这点，还有两个重要作用，一是稳定标记物，二是提供离心环境，这两个作用出镜率不及“封闭位点”，但是随着了解的更加深入，你会发现封闭表面的作用太肤浅了，“稳定标记物”和“提供离心环境”才是最重要的，解决死金的思路都在这里。
首推的封闭剂是BSA，质量很关键，涛哥有过长篇论述，不同厂家的BSA，在封闭时会有很大差异，所以，一开始选择一种好的BSA很重要（好在有人专门卖胶体金产品用的BSA，可以排除BSA厂家的因素，让你专注其他问题）。
如果操作过程中出现异常，观察每一步的实验现象会有助于发现和解决问题，与BSA相关的比如：
质量很好的BSA能够胜任绝大部分封闭工作，封闭离心复溶一切正常，而质量一般的BSA只能用于一部分标记单抗的封闭，如果标记特殊亚型单抗或者重组抗原，封闭没问题，但是离心会死金。
另外一些情况是，有些BSA溶解后是酸性的，用他封闭会导至标记蛋白带正电从而引起死金（可以尝试用Tris溶解BSA，整体呈碱性），有些BSA含杂质盐，用他封闭会破坏金标物的斥力从而引起死金。这两点基本上在封闭时就表现出异常了。
如果你常用的BSA没有换，标记的抗体也没有换，离心出现异常，多半是标记Ph和胶体金本身的质量问题。
在这里我想说一下我对BSA封闭机理的推论，我认为其主要作用力就是金硫键。BSA等电点4.7，我们标记时的Ph远大于其等电点，为什么一般情况下，我们标记抗体或抗原时，别说远远高于了，就是一般的高于等电点，标记后活性都大打折扣（标记效率极低），但是这个BSA封闭，无论什么Ph都能很好封闭胶体金裸露位点，而且还是人家抗体不愿意（难）结合的剩余位点，虽然BSA过量是一个因素，但是如果是很高的标记Ph，过量的蛋白进行标记也是浪费。不否认BSA浑身负电，仍有正电基团，但是Ph远远高于等电点，正电基团数量少得可怜，所以正负电荷引力难堪重任，甚至相互吸引接触都成问题。如果说主要靠疏水，在强大斥力存在时，疏水基团碰撞结合的几率也很低，那为什么其他蛋白远离等电点时，疏水结合很难起作用，但BSA却能很好结合？
所以最后只有一种可能，就是金硫键，BSA有581（也有说583）个氨基酸残基组成，分子量66.4KD，其中有35个半胱氨酸，组成了17个二硫键，在肽链的第34位还有一自由巯基。这个自由巯基很容易与胶体金形成共价结合，而且共价结合力远远强于静电和疏水，同时他不受Ph条件的影响，并且共价键具有饱和性，所以一个BSA只能通过一个自由巯基结合一个胶体金，不会引起金子的聚集，但是一个胶体金可以结合多个BSA，所以封闭后的金标物带有更多负电荷，能够更稳定、更分散。
实验现象表明BSA的加入，会让某些轻微变紫色的金子回复成红色，这是本已聚集的胶体金颗粒重新分散的表现，这说明BSA在封闭时有很强的负电斥力，并且很高效的结合到了胶体金上，与上面的推论相吻合。
所以我认为，金硫键是BSA封闭胶体金时的主要作用力。关于BSA的封闭机理，每个人会有各自的看法，至少目前没有统一的定论，这只是我根据几种作用力的原理及实验现象得出的推论，大家看看就行，反正不知道原理，直接用也不会有问题。
另外一个常用的封闭剂是酪蛋白，比BSA保护作用更强，甚至标记时已经死了的金都能安全离心，这是一件好事，也是一件头疼的事，可以慢慢体会。但是刚接触一个项目的时候，不建议用酪蛋白封闭，如果对反应体系不了解，酪蛋白封闭容易筛选出有缺陷的原料，从而引发一系列意想不到的问题。常见的降低灵敏度、产品特异性缺陷，罕见的金子释放异常等。
（二）操作
上面大篇幅都围绕Ph展开，因此不难想象Ph是标记优化的一个关键点，总结起来就4个字——高效、稳定。很多流程里，摸索最佳Ph都是优化标记的第一步，但是如果大家对第一话《烧金》的内容还有印象的话，那么标记的第一步首先应该是找到合适的容器，因为胶体金有洁癖。
1.容器：
推荐用清洗过的西林瓶（玻璃瓶）。因为两点原因，不推荐用ep管，一是不干净，你可以做个实验，拿十几个离心管，装好胶体金，其他什么都不
白话胶体金系列——第二话<标记>上篇
（一）基本概念
为了方便新人与老司机交流，需要掌握一些基本名词和概念，以便准确的表述问题。这些知识不考试，写作时间也有限，关键还没有稿费，所以随便写写，没有咬文嚼字，如果意思表达错了请指正，形式上就不用对着教科书抠字眼了，谢谢。
1.抗原、抗体，和二抗：
抗原（半抗原）：能够诱导产生抗体（免疫原性）并且和这个抗体特异性结合（抗原性）的物质，一般称为大分子物质。半抗原是只有抗原性，而不能诱导产生抗体的物质，称小分子物质，通常只有一个抗原决定簇。一般低于10KD免疫原性就很差了，但免疫原性与分子量没有绝对关系，还要看结构的。
抗体：能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。单抗和多抗，单抗是针对一个抗原决定簇的，单一类型的抗体；多抗是针对同一免疫原（一个或多个抗原决定簇）的不同单抗的混合体。种类上又分IgG、IgM等，IgG又分不同亚型，1、2a、2b等。结构上是Y型，上面两个相同的可变区Fab与抗原特异性反应，恒定区Fc具有种属特异性。
二抗：以抗体（通常只是Fc片段）免疫另一物种产生的一种抗体，有多抗比如羊抗鼠IgG（Goat" />
（一）基本概念
为了方便新人与老司机交流，需要掌握一些基本名词和概念，以便准确的表述问题。这些知识不考试，写作时间也有限，关键还没有稿费，所以随便写写，没有咬文嚼字，如果意思表达错了请指正，形式上就不用对着教科书抠字眼了，谢谢。
1.抗原、抗体，和二抗：
抗原（半抗原）：能够诱导产生抗体（免疫原性）并且和这个抗体特异性结合（抗原性）的物质，一般称为大分子物质。半抗原是只有抗原性，而不能诱导产生抗体的物质，