杂交捕获法原理

定量PCR技术基本原理和方法以及PCR产物的检测与定量-3

1) 特异性捕获检测法(非探针杂交捕获)本法是非特异性检测PCR产物的一种方法,用生物素标记引物和地高辛标记duTP或用生物素和地高辛分别标记其引物。经PCR扩增后,PCR产物中同时掺入了生物素和地高辛。用生物素包被孔捕获PCR产物,用酶(AKP)标抗地高辛和产物反应,加底物显色进行定量,此法是非序列特异性检测,显色来自所有的扩增产物。本法仅应用于非常特别的PCR扩增产物检测。(2) 特异性探针捕获

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PCR实验中的污染预防及处理(三)

1. 原理:在PCR 产物或引物中用dU 代替dT。这种dU 化的PCR 产物与UNG 一起孵育,因UDG 可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键,可除去dU 而阻止TaqDNA 聚合酶的延伸,从而失去被再扩增的能力。UNG 对不含dU 的模板无任何影响。UNG 可从单或双链DNA 中消除尿嘧啶,而对RNA 中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。 2. d

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mRNA的提取及纯化(磁珠法和亲和柱层析法)

真核细胞的mRAN是单顺反子,其最显著的特征是具有5'端帽子结构和3'端的poly A的结构,此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径,人们利用碱基配对原理,采用寡聚T结构作为亲和柱材料,当含mRNA的总RNA样品流经寡聚T柱时,mRAN即被特异性的结合到柱上,从而可与其它RNA相分开,这就是寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)琼脂糖亲和柱分离mRAN的原理。目前虽然mRNA

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