脉冲凝胶电泳(PFGE,Pulsed Field Gel Electrophoresis)是一种分离大分子DNA的方法。在普通的凝胶电泳中,大的DNA分子(>10kb)移动速度接近,很难分离形成足以区分的条带。在脉冲场凝胶电泳中,电场不断在两种方向(有一定夹角,而不是相反的两个方向)变动。DNA分子带有负电荷,会朝正极移动。相对较小的分子在电场转换后可以较快转变移动方向,而较大的分子在凝胶中转向较为
脉冲凝胶电泳(PFGE,Pulsed Field Gel Electrophoresis)是一种分离大分子DNA的方法。在普通的凝胶电泳中,大的DNA分子(>10kb)移动速度接近,很难分离形成足以区分的条带。在脉冲场凝胶电泳中,电场不断在两种方向(有一定夹角,而不是相反的两个方向)变动。DNA分子带有负电荷,会朝正极移动。相对较小的分子在电场转换后可以较快转变移动方向,而较大的分子在凝胶中转向较为
双向电泳就是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合。
先进行等电聚焦电泳(按照蛋白等电点pI分离):在胶中加入双性电解质溶液,加上电场后建立稳定PH梯度,蛋白质溶液加入后建立电场,蛋白以不同PI分离开来。
2.然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小):将上一步的胶加上横向电场,同一PI中聚集的蛋白,由于分子量不同而分开。
经染色(一般是银染)得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。
二维电泳
水平、垂直、转移、管式各种电泳槽迷你垂直转移槽垂直电泳管式凝胶电泳仪迷你垂直电泳槽多用途水平电泳仪
毛细管电泳仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用带电粒子之间的淌度和分配系数的差异进行分离。毛细管电泳仪与平板凝胶电泳仪的比较如下:
一、检测器选择:
1、毛细管电泳仪:多
2、平板凝胶电泳仪:少
二、分离度:
1、毛细管电泳仪:高
2、平板凝胶电泳仪:低
三、定量分析:
1、毛细管电泳仪:与高效液相色谱仪相当
2、平板凝胶电泳仪:困难
四、自动化:
1、毛细管电泳仪:容易
2、平板凝胶电泳仪:困难
实验材料 DNA样品
试剂、试剂盒 尿素去离子甲酰胺丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺琼脂糖
仪器、耗材 PCR扩增仪变性梯度凝胶电泳仪凝胶成像及分析系统紫外透射仪高速离心机电泳仪电泳槽微量加样器Tip头Tip头盒Eppendorf管Eppendorf管架