荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和SyberGreen分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和SyberGreen结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。
接近Tm时，突然变化
一次pcr的时间不是固定的,要根据循环数决定。一般一次pcr需要70-90分钟,如果加上前面加样时间,一般两个小时左右。一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐
荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和SyberGreen分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和SyberGreen结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。
接近Tm时，突然变化
实时PCR产物的Tm值大小一般会在80°上下，所以溶解曲线不必从40°开始，可以从65°开始进行溶解曲线绘制，另外在产物之前出现的小峰，同时也在阴性对照中出现了，应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
没有溶解曲线说明对应的pcr管中没有产物。qpcr的溶解曲线就是对应孔内pcr产物对应的tm值。如果一个孔没有溶解曲线说明这个孔中没有产物，没有产物的原因有很多种，例如：pcr反应体系中可能没有加模板或者加酶或者引物等，少一个成分都会导致相应的孔没有溶解曲线，也有可能是。
定量引物是NCBI上设计,特异性没问题,并且跑普通PCR条带特异也很好。跑定量时内参的溶解曲线峰没问题,重复性也好。就是自己的引物跑出了双峰,重复性差,达到了2。