实验方法原理
由于生物样品主要由碳、氢、氧、氮等元素组成,散射电子的能力很低,在电镜下反差小。所以在进行电镜的生物样品制备时通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差,提高观察效果。负染色法就是用电子密度高,本身不显示结构且与样品几乎不反应的物质(如磷钨酸钠或磷钨酸钾)来对样品进行「染色」, 由于这些重金属盐不被样品成分所吸附而是沉积到样品四周,如果样品具有表面结构,这种物质还能穿透进表
透射电镜样品的制备方法很多。其中滴液法,或在滴液法基础上发展出来的其他类似方法如直接贴印法、喷雾法等主要被用于观察病毒粒子细菌的形态及生物大分子等。由于生物样品散射电子的能力很低,所以通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差,提高观察效果。负染色法由于操作简单,目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。
本实验将主要介绍采用滴液法结合负染色技术观察细菌的形态。
实验方法原理由于生物样品主
可以测,用负染法或者冷冻透射电镜。
细胞悬液涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,以银显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的敏感性。
免疫胶体金电镜染色法
可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。
1.电镜检查 HPV是最早在电镜下观察到的病毒之一,将活检标本负染,若能在电镜下见到特征性的病毒颗粒,即可作出诊断;而用免疫电镜可提高检出率。电镜检查法虽然准确率很高,但费时,需特殊仪器设备,且检出阳性率很低。
2.PCR技术 应用此法可检测HPV-DNA,还可进行基因分型。灵敏度可达1fg,该法操作简便省时,而且标本来源不受限制,如病变组织或脱落细胞,分泌物或黏液,新鲜标本或保存已久的石蜡切
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