iTRAQ

定量蛋白质组表达谱分析技术——iTRAQ/TMT

iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用2-10种稳定同位素标签,通过特异性 标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量。

iTRAQ/T

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iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程(二)

“那iTRAQ的原理是什么,有哪些优势?”

“iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)技术由美国AB SCIEX公司研发,最早于2004年美国质谱年会上被提出,是一种基于体外等重同位素标记的相对定量技术。该技术利用同位素试剂标记多肽,经高分辨质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白质表达量,同时兼具灵敏度高、

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iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程(一)

大家好,我是黄博,吉凯一小兵,蛋白质组学实验狗。今天的故事是一个作文从没及格过的闷骚理科男(我一直是这么定位自己的)是如何被陈博内个大尾巴狼生生逼来写文章的故事,真的是有血、有泪、有shi!情节需要,中间可能会穿插一些技术方面的内容,请各位自动忽略。

那是一个月黑风高的晚上,本人和大尾巴狼(我实在不想提他的名字,下同)在机场大巴上,当时我正托腮凝视窗外,撩人的夜色多么沉醉……

“黄博!”大尾巴狼忽然说:

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为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测..

为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到?

人血浆中的蛋白是有上万种的,而一般质谱只能检测到五六百种,也就是说只占了其中的百分之几,这是普遍现象,说明咱们的方法是不存在问题的;

其次,ELISA/WB与质谱相对来说灵敏度不一样,前者具有放大效应,因为其间会用到相应的抗体,所以只要选对抗体,感兴趣的蛋白基本都会被检测到;

因此, ELISA/WB检测到的蛋白在组学中没有被检测

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蛋白质组学哪些技术需要进行重复实验?

Label free需要进行三次重复,而iTRAQ、TMT一般建议客户做3次实验重复,如果实验方案后期设计了大量的验证实验如WB或ELISA等,最好做也能做两次重复;如果不进行重复实验后期的验证实验也少,在后期发表文章的时候结果可能会受到一些审稿人的质疑,从而影响文章的发表,特别是一些高分杂志较为突出,对于立志于发表高水平文章的研究人员建议客户最好进行重复实验设计。

如果是进行技术重复,各实验结果

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蛋白质组学之逆袭:深度注释基因组(三)

人类尚未充分认识复杂的癌症基因组是如何转化为导致复发和死亡的驱动生物学的,将蛋白质组学与基因组学结合在一起能够让我们获得对癌症的新认识,同时提供一种有价值的资源以便科学界能够用来提出关于这些疾病的新假设,以及治疗它的手段。蛋白质基因组学终有一天会被证明是一种强大的临床工具,使得人类能够横跨癌症基因组学与临床效应之间巨大的知识鸿沟。

以上两个案例中,蛋白质组学都使用了他独门绝技串联质谱技术中关键的一招—

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