1、什么是iTRAQ？ iTRAQ技术，即同位素相对标记与绝对定量技术。该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性。由于其能够同时对多达8种样品进行标记分析,故在生命科学的各个领域得到了广泛的应用。2、iTRAQ的原理是什么？ iTRAQ的检测可以做这样的比喻，蛋白被打成肽段后，被平均的铺在了一个有384个孔的平板上，然后
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术。这两种技术采用2-10种稳定同位素标签，通过特异性 标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量。
iTRAQ/TMT
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Differential proteomic analysis revealing the ovule abortion inthe female-sterile line of Pinustabulaeformis Carr.
Plant Science 260 (2017) 31-49
研究背景
胚珠败育严重影响油松产量。对于胚珠
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到？
人血浆中的蛋白是有上万种的，而一般质谱只能检测到五六百种，也就是说只占了其中的百分之几，这是普遍现象，说明咱们的方法是不存在问题的；
其次，ELISA/WB与质谱相对来说灵敏度不一样，前者具有放大效应，因为其间会用到相应的抗体，所以只要选对抗体，感兴趣的蛋白基本都会被检测到；
因此， ELISA/WB检测到的蛋白在组学中没有被检测
蛋白质磷酸化发挥作用的途径：（信号传导）2. 真核细胞蛋白质磷酸化位点一般位于（丝氨酸）、（苏氨酸）、（赖氨酸）3. 蛋白激酶在细胞信号转导途径主要作用：（调节细胞活性）、（放大传导信号）4. 目前常用的磷酸肽富集方式（TiO2）、（IMAC）5. 磷酸化蛋白组定性分析包括（单一磷酸化位点鉴定）、（全谱鉴定）6. 磷酸化蛋白组定量分析包括（iTRAQ）、（label free）、（SWATH）7.
Label free需要进行三次重复，而iTRAQ、TMT一般建议客户做3次实验重复，如果实验方案后期设计了大量的验证实验如WB或ELISA等，最好做也能做两次重复；如果不进行重复实验后期的验证实验也少，在后期发表文章的时候结果可能会受到一些审稿人的质疑，从而影响文章的发表，特别是一些高分杂志较为突出，对于立志于发表高水平文章的研究人员建议客户最好进行重复实验设计。
如果是进行技术重复，各实验结果