dPCR

  上世纪八十年代Cetus Corporation公司的化学家Kary Mullis发明了PCR，如今DNA扩增俨然已经成为了生物学研究的基础。三十多年以来，人们为了解决研究中出现的新问题新需求，不断对这一经典技术进行改良。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，PCR技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。如今PCR技术早已走出实验室，在遗传学鉴定和疾病诊断中发挥着巨大的作用，在越

复杂生物样本（含PCR抑制剂）中DNA/RNA绝对定量的解决方案： Crystal dPCR更耐受抑制剂

dPCR和qPCR(Real-time PCR)技术定量检测DNA/RNA时抑制剂的影响对比

众所周知，数以千种的化学物质会抑制PCR反应有作用，而生物样本往往都会含有类似的化合物，在DNA/RNA纯化时，这类化合物很难去除，所以会存在DNA/RNA样本中。

> qPCR和Crystal dPCR进

　　数字PCR简介

　　数字PCR（Digtal PCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。

　　基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数

 dPCR的优点

    实现绝对定量

    更高的敏感性和特异性

    可以检测低拷贝样品

    dPCR的缺点

    1.仪器设备和试剂昂贵

    2.操作复杂，检测时间长

    3.检测范围较窄

 在一份给定的样本中，相比于野生型DNA，癌症相关的突变序列比例较低，经常无法检测。而凭借其超高灵敏度，dPCR系统可以很容易地定量分析低至0.001%-0.0001%的突变频率。之前用任何方法都无法实现准确稳定检测的样本，现在可以使用dPCR轻松进行定量分析。例如，已实现肺癌相关的表皮生长因子受体（EGFR）中T790M突变的检测，可以更好地评估抗酪氨酸激酶抑制剂的治疗。

数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。