bradford法测蛋白浓度

Bradford法测蛋白浓度

原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。溶液:①Bradford储存液100ml95%乙醇200ml88%磷酸350mgServaG蓝室

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蛋白质含量测定实验

Bradford法

           

实验材料

蛋白质

试剂、试剂盒

牛血清 NaCl

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SD大鼠神经视网膜组织总蛋白质提取

实验概要

本实验提取SD大鼠神经视网膜组织总蛋白质,用Bradford法测样品蛋白浓度,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定。

实验材料

经过分离和鉴定的SD大鼠神经视网膜组织

实验步骤

1. 神经视网膜组织总蛋白质提取

标本称重,置于研磨器中,液氮内研磨,按1:5( W/V)比例加入裂解缓冲液,涡旋震荡30秒,离心。4℃冰箱孵育1小时,期间每15分钟涡旋震荡1次,每次约30秒。40,000 g

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4种常用蛋白浓度测定方法的比较

蛋白浓度测定方法有很多种,各种蛋白质含量测定的研究也屡见报道。每种方法都有其优点和局限性,在蛋白质样品中往往会含有一些化学试剂,有些化学试剂会干 扰蛋白浓度测定。因此,寻找合适的实验方法以避免干扰对蛋白浓度测定的准确性至关重要。基于Lowry法在测定PEG_IL_6样品时出现大量黄绿色沉 淀,尿素对BCA法测定蛋白浓度测定有严重干扰,影响结果准确性,我们试验了外两种方法,并进一步对方法进行了比较分析

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