MTT结果和流式结果

MTT指南(配制、原理、操作步骤、结果分析与注意事项)-1

一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、MTT法用来做什么简单地说:是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT主要有两个用途1.药物(也包括其他处

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MTT指南(配制、原理、操作步骤、结果分析与注意事项)-2

(3)从第一步准备的3ml细胞悬液中取1ml, 加入上管,混匀后细胞计数,此时一般为或小于5-10×104/ml,该浓度相当于细胞计数板4个大格内每大格平均5-10个细胞(见下图);如果不够该浓度,再根据计数的结果滴加细胞悬液,每滴按50ul计算。4)细胞数量因实验目的不同应做相应调整,如一般细胞增殖实验每孔2000个就可以(相当于细胞悬液密度为2×104/ml),细胞毒性实验每孔5000—1000

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MTT原理、步骤与结果分析方法及注意事项

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下 tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与

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MTT溶液的配制方法

通常MTT浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。

需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

MTT

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靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 WST-8是MTT的一种升级替代

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绘制细胞增殖曲线

实验概要

为了掌握细胞的增殖速率,常用的方法有不同时间点细胞数目统计、MTT法绘制增殖曲线等。下面以MTT法为例,简述绘制增殖曲线的方法。

实验原理

活细胞线粒体中的脱氢酶能够还原黄色的MTT为蓝紫色的不溶于水的甲瓉(formazan),甲瓉的多少可通过酶标仪测定其在490nm处的光密度(Optical Density,OD)值而得知。因为甲瓉生成量在通常情况下与活细胞数成正比,因此可以通过OD值推测

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